Two-Hybrid Systems: Methods and Protocols

سیستم دو هیبریدی مخمر یکی از پرکاربردترین و مولدترین تکنیک‌های موجود برای بررسی برهم‌کنش‌های ماکرومولکولی است که تقریباً بر تمام فرآیندهای بیولوژیکی تأثیر می‌گذارد. در دو سیستم هیبریدی: روش ها و پروتکل ها، Paul N. MacDonald مجموعه ای از این ابزارهای مولکولی قدرتمند را برای بررسی و توصیف برهمکنش های پروتئین-پروتئین، پروتئین-DNA و پروتئین-RNA جمع آوری کرده است. این تکنیک ها از ابتدایی ترین (معرفی پلاسمیدها به مخمرها، سنجش برهمکنش، و بازیابی پلاسمیدها از مخمر) تا پیشرفته ترین استراتژی های جایگزین (شامل یک هیبرید، تقسیم دو هیبرید، سه هیبرید، سیستم های استخدام غشایی و پستانداران را شامل می شود. سیستم های). روش‌هایی نیز برای مقابله با مشکلات شناخته شده مصنوعات و موارد مثبت کاذب و شناسایی شرکای متقابل در سیستم‌های مهم بیولوژیکی، از جمله مسیرهای گیرنده Smad و هسته‌ای ارائه شده‌اند. برای اطمینان از تکرارپذیری آماده و نتایج قوی، هر تکنیک با جزئیات گام به گام توسط محققانی که به طور منظم از آن استفاده می کنند، توضیح داده شده است.
سیستم های جامع و بسیار کاربردی، دو ترکیبی: روش ها و پروتکل ها نه تنها نشان می دهد که چگونه تنوع بسیار زیاد بردارها و رویکردهای پلاسمید ممکن است به طور بهینه به کار گرفته شوند، اما همچنین به سرعت به تازه‌کاران اجازه می‌دهد تا سیستم‌های دو هیبریدی را در آزمایشگاه‌های خود ایجاد کنند و محققان با تجربه را برای گسترش مجموعه تکنیک‌های خود.

The yeast two-hybrid system is one of the most widely used and productive techniques available for investigating the macromolecular interactions that affect virtually all biological processes. In Two-Hybrid Systems: Methods and Protocols, Paul N. MacDonald has assembled a collection of these powerful molecular tools for examining and characterizing protein-protein, protein-DNA, and protein-RNA interactions. The techniques range from the most basic (introducing plasmids into yeasts, interaction assays, and recovering the plasmids from yeast) to the most advanced alternative strategies (involving one-hybrid, split two-hybrid, three-hybrid, membrane recruitment systems, and mammalian systems). Methods are also provided for dealing with the well-known problems of artifacts and false positives and for identifying the interacting partners in important biological systems, including the Smad and nuclear receptor pathways. To ensure ready reproducibility and robust results, each technique is described in step-by-step detail by researchers who employ it regularly.
Comprehensive and highly practical, Two-Hybrid Systems: Methods and Protocols not only reveals how the great variety of plasmid vectors and approaches may be optimally deployed, but also quickly empowers novices to establish two-hybrid systems in their laboratories, and experienced researchers to expand their repertoire of techniques.