Tissue Culture Techniques: An Introduction

تشکرات . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xl II مقدمه . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . من عقیمی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 تکنیک آسپتیک. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 دستکاری های فیزیکی • استفاده از کابینت استریل (هود) روش های استریلیزاسیون . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 گرما • تشعشع • گاز سمی • فیلتراسیون • آنتی بیوتیک ها کنترل کیفیت استریلیزاسیون . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 برچسب زدن روتین مطالب پیشنهادی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 تمرین. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 vi محتویات کشت سلولی معمولی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 برنامه های تغذیه و اجزای رسانه . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 خواص کلی محیط‌ها و محلول‌های نمکی • آب به‌عنوان یک معرف · ایجاد برنامه‌های تغذیه زیرکشت. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 راه حل ها و روش ها برای سلول های چسبنده • محلول های آنزیمی رایج • تلقیح (بذر) کشت ها تعداد سلول ها و زنده ماندن سلول ها. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54 هموسیتومتر • شمارشگر ذرات • زنده ماندن سلولی استفاده از روشهای معمول. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63 ویژگی های رشد سلولی طبیعی تشخیص و دفع آلودگی. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 باکتری ها و قارچ ها • قارچ ها • مایکوپلاسما • ویروس ها • مقابله با آلودگی عیب یابی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 رشد ناکافی سلول • آلودگی مکرر • چه زمانی با فروشنده تماس بگیرید ایمنی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80 خطرات بیولوژیکی • خطرات شیمیایی مطالب پیشنهادی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 مجموعه مسائل . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 تمرین . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89 آزمایش در فرهنگ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 II تغییرات رسانه ها . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 سرم • درمان سرم • سرم مشتق شده از پلاسما • بسترهای بدون سرم و پروتئین کم. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101 پوشش ظروف پلاستیکی با محلول • تغییرات با پلیمرها • استفاده از سلول ها برای پوشش ظروف پلاستیکی • کشت سلول ها روی ریزحامل ها تغییر محیط. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106 تغییرات دما • تنظیم مشکلات تغییرات گازی . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 تمرین . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 محتوا vii کشت سلولی اولیه. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113 انزوا . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114 تشریح • روش های تفکیک آنزیمی • جداسازی غیر آنزیمی • خالص سازی سوسپانسیون های سلولی • در نظر گرفتن بازده و بقا Chatacterization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ACKNOWLEDGMENTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xl II INTRODUCTION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I STERILITY . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Aseptic Technique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Physical manipulations • Use of the sterile cabinet (hood) Sterilization Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Heat • Radiation • Toxic gas • Filtration • Antibiotics Quality Control of Sterilization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 Routine labeling Suggested Readings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 vi CONTENTS ROUTINE CELL CULTURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 Feeding Schedules and Media Components . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 General properties of media and salt solutions • water as a reagent· Establishingfeeding schedules Subcultivation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Solutions and methods for adherent cells • Common enzyme solutions • Inoculating (seeding) the cultures Cell Enumeration and Cell Viability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54 Hemocytometer • Particle counter • Cell viability Putting Routine Methods to Work . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63 Normal cell growth characteristics Detecting and Disposing of Contamination . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 Bacteria and fUngi • Fungi • Mycoplasma • Viruses • Dealing with contamination Troubleshooting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 Inadequate cell growth • Recurrent contamination • When to call your vendor Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80 Biological hazards • Chemical hazards Suggested Readings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Problem Set . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89 EXPERIMENTS IN CULTURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 II Alterations of the Media . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 Serum • Treatments of serum • Plasma-derived serum • Serum-free and low-protein media Substrata. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101 Coatingplasticware with solutions • Alterations with polymers • Using cells to coat the plasticware • Culturing cells on microcarriers Altering the Environment. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106 Temperature changes • Gaseous changes Problem Set . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 CONTENTS vii PRIMARY CELL CULTURE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113 Isolation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114 Dissection • Enzymatic dissociation methods • Nonenzymatic isolation • Purification of cell suspensions • Consideringyield and survival Chatacterization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .