The Baculovirus Expression System: A laboratory guide

تصمیم برای نوشتن کتابی در مورد جنبه‌های عملی سیستم بیان باکولوویروس از تماس‌های تلفنی متعددی که برای کمک داشته‌ایم، و از بازدیدکنندگان زیادی که از آزمایشگاه‌های ما برای یافتن ویروس پلی‌هدرین منفی گریزان نیاز به کمک دارند، ناشی می‌شود. ژن مورد علاقه آنها ما همچنین دو کارگاه آموزشی سیستم بیان ترتیب داده‌ایم و از کتاب‌های راهنما که برای آن‌ها نوشته‌ایم، توسعه آنها به شکل کتاب پیشرفتی منطقی به نظر می‌رسد. ما قدردانی می‌کنیم که کسانی که در سیستم بیان باکولوویروس «دست‌های قدیمی» هستند ممکن است دیدگاه‌های متفاوتی در مورد برخی از روش‌های ما داشته باشند، اما روش‌های موجود در این کتاب در پرتو تجربیات خود ما در آزمایشگاه و از کارگاه‌های عملی ما ارائه شده‌اند. و ما امیدواریم که این کتاب به ویژه برای کسانی که تازه وارد سیستم شده اند مفید باشد. سه فصل اول اطلاعات پس‌زمینه سیستم بیان باکولوویروس را ارائه می‌دهد و شامل توصیه‌هایی در مورد نحوه انتخاب ناقل انتقال مناسب است و روش‌های مختلفی را که برای انتخاب ویروس‌های نوترکیب در دسترس هستند، مورد بحث قرار می‌دهد. فصل‌های عملی بر جنبه‌هایی تمرکز می‌کنند که برای سیستم باکولوویروس جدید هستند (کشت سلول حشرات، تقویت و تیتراسیون ویروس، و غیره) و به طور کلی، تکنیک‌های بیولوژیکی مولکولی استاندارد را به سایر کتاب‌های راهنمای آزمایشگاهی عالی که در دسترس هستند واگذار می‌کنند. با این حال، برای کامل بودن و جلوگیری از ارجاع دائمی به سایر راهنماها، جزئیات مختصری از برخی تکنیک‌های استاندارد را درج کرده‌ایم که در موفقیت پروتکل‌های باکولوویروس نقش مهمی دارند.

The decision to write a book about the practical aspects of the baculovirus expression system stems from the numerous phone calls for help we have had, and from the many visitors to our labora­ tories requiring assistance to find the elusive polyhedrin-negative virus containing their favourite gene. We have also organized two expression system workshops and from the manuals we wrote for these, it seemed a logical progression to extend them into book form. We appreciate that those who are 'old-hands' at the baculovirus expression system may have differing views on some of our procedures, but the methods in this book are presented in the light of our own experiences in the laboratory and from our practical workshops, and we hope that the book will be especially useful to those new to the system. The first three chapters give the background information to the baculovirus expression system, and includes advice on how to choose the right transfer vector and discusses the various methods that are available to select recombinant viruses. The practical chapters concentrate on those aspects which are novel to the baculovirus system (insect cell culture, virus amplification and titration, etc. ) and, in general, leave the standard molecular biological techniques to the other excellent laboratory manuals that are available. However, for completeness sake and to avoid constant reference to other manuals, we have included brief details of some standard techniques where they are integral to the success of the baculovirus protocols.