Split Inteins: Methods and Protocols

این جلد بر کاربردهای اسپلیت اینتین ها و پیشرفت هایی که در 5 سال گذشته در زمینه کشف و مهندسی اسپلیت اینتین های سریع و کارآمدتر حاصل شده است، تمرکز دارد. چند فصل اول در Split Inteins: Methods and Protocols تکنیک‌های جدید در مورد نحوه استفاده از split inteins برای خالص‌سازی میل ترکیبی پروتئین‌های بیش از حد تولید شده و فناوری‌های مبتنی بر split-intein برای تهیه پپتیدها و پروتئین‌های حلقوی را بررسی می‌کند. چند فصل بعدی در مورد پیوند ترانس پروتئین نیمه مصنوعی با استفاده از یک قطعه اینتئین مصنوعی، قطعات مصنوعی اینتئین-اکستئین مورد استفاده برای تحویل محموله های دیگر برای اصلاح شیمیایی پروتئین های خالص شده و پروتئین ها در سلول های زنده، و همچنین برچسب گذاری ایزوتوپی پروتئین ها برای مطالعات NMR بحث می کند. و بحثی در مورد اینکه چگونه کوپلیمرهای بلوک پروتئینی می توانند توسط ترانس اسپلایس پروتئین برای تشکیل هیدروژل پروتئین تولید شوند. چند فصل آخر به کاربردهای اینتین در گیاهان تراریخته و اینتئین‌های شرطی می‌پردازد که می‌توانند به روش‌های مصنوعی توسط مولکول‌های کوچک یا نور تنظیم شوند، یک رویکرد مبتنی بر کاست برای آزمایش سریع بسیاری از موقعیت‌های درج اینتئین، و یک رویکرد محاسباتی برای پیش‌بینی مکان‌های جدید تقسیم اینتئین. (رویکرد برای سایر پروتئین ها نیز کار می کند). این فصل‌ها که با فرمت بسیار موفق روش‌ها در زیست‌شناسی مولکولی نوشته شده‌اند، شامل مقدمه‌ای بر موضوعات مربوطه، فهرستی از مواد و معرف‌های لازم، پروتکل‌های آزمایشگاهی گام به گام، قابل تکرار آسان و نکاتی در مورد عیب‌یابی است. و اجتناب از تله‌های شناخته شده.

جدید و کامل، Split Inteins: روش‌ها و پروتکل‌ها منبع ارزشمندی است که راهنمایی‌هایی را به سمت احتمالات کاربردهای split intein ارائه می‌کند، پروتکل‌های اثبات شده و دقیق را بررسی می‌کند. قابل انطباق با پروژه های تحقیقاتی مختلف و الهام بخش پیشرفت روش های جدید.

This volume focuses on applications of split inteins, and the progress that has been made in the past 5 years on discovery and engineering of fast and more efficient split inteins. The first few chapters in Split Inteins: Methods and Protocols explore new techniques on how to use split inteins for affinity purification of overproduced proteins, and split-intein based technologies to prepare cyclic peptides and proteins. The next few chapters discuss semisynthetic protein trans-splicing using one synthetic intein piece, synthetic intein-extein pieces used to deliver other cargos for chemical modification both of purified proteins and of proteins in living cells, as well as isotopic labeling of proteins for NMR studies, and a discussion on how protein block copolymers can be generated by protein trans-splicing to form protein hydrogels. The last few chapters deal with intein applications in transgenic plants and conditional inteins that can be regulated in artificial ways by small molecules or light, a cassette-based approach to quickly test many intein insertion positions, and a computational approach to predict new intein split sites (the approach also works for other proteins). Written in the highly successful Methods in Molecular Biology series format, chapters include introduction to their respective topics, lists of the necessary materials and reagents, step-by-step, readily reproducible laboratory protocols, and tips on troubleshooting and avoiding known pitfalls.

Cutting-edge and thorough, Split Inteins: Methods and Protocols is a valuable resource that will provide guidance toward possibilities of split intein applications, explore proven and detailed protocols adaptable to various research projects, and inspire new method developments.