Principles and Technical Aspects of PCR Amplification

کاری مولیس بیش از 15 سال پیش در سال 1993 جایزه نوبل را برای اختراع تکنیک PCR دریافت کرد. از زمان "کشف" آن، انطباق ها و تغییرات متعددی از تکنیک استاندارد PCR شرح داده شده است. این سازگاری ها و تغییرات در حال حاضر در آزمایشگاه های بالینی، تشخیصی و دانشگاهی در سراسر جهان استفاده می شود. علاوه بر این، این تکنیک‌ها در سطح تشخیصی (مثلاً به‌عنوان روش‌های آزمایش توان عملیاتی بالا برای شناسایی حداقل بیماری باقی‌مانده، وجود/عدم وجود پاتوژن‌های خاص و غیره) و همچنین برای افزایش درک ما از فرآیندهای اساسی بیماری استفاده می‌شوند.

اغلب، تکنسین ها و متخصصان PCR درک خود را از PCR به یک روش خاص محدود می کنند. با این حال، این رویکرد درک آنها را از طیف وسیعی از تکنیک‌های PCR همه کاره در حال حاضر محدود می‌کند، تکنیک‌هایی که ممکن است برای شرایط آزمایشگاهی خودشان کاربردی‌تر و در واقع مناسب‌تر باشند.

هدف این راهنما این است که راهنمای تکنیک استاندارد PCR و بسیاری از تغییرات موجود آن، با تاکید ویژه بر نقش تکنیک‌های PCR در آزمایشگاه تشخیصی (موضوع اصلی این راهنما) به خواننده ارائه دهید. علاوه بر این، بسیاری از مسائل فنی مهم، از جمله انواع مواد قالب PCR، بهینه‌سازی PCR، تجزیه و تحلیل محصولات PCR، کنترل کیفیت و تضمین کیفیت، انواع و انطباق‌های پروتکل PCR استاندارد، PCR کمی و PCR درجا پرداخته شده‌اند. خواننده این راهنما به خوبی از اصول اساسی PCR و پتانسیل واقعی PCR در آزمایشگاه بالینی مطلع خواهد شد.

Kary Mullis was awarded a Nobel Prize for inventing the PCR technique more than 15 years ago in 1993. Since its "discovery", multiple adaptations and variations of the standard PCR technique have been described, with many of these adaptations and variations currently being used in clinical, diagnostic and academic laboratories across the world. Further, these techniques are being applied at the diagnostic level (e.g. as high throughput testing methodologies to detect minimum residual disease, the presence/absence of specific pathogens etc), as well as to increase our understanding of fundamental disease processes.

Frequently, PCR technicians and specialists limit their understanding of PCR to one particular methodology. However, this approach limits their appreciation of the range of versatile PCR techniques currently available, techniques that may be applicable and indeed more suitable to their own laboratory situation.

This manual aims to provide the reader with a guide to the standard PCR technique and its many available modifications, with particular emphasis on the role of PCR techniques in the diagnostic laboratory (the central theme of this manual). Further, many important technical issues have been addressed, including types of PCR template material, PCR optimization, the analysis of PCR products, quality control and quality assurance, variants and adaptations of the standard PCR protocol, quantitative PCR and in situ PCR. The reader of this manual will be excellently informed about the fundamental principles of PCR and the true potential of PCR within clinical laboratory practice.