مشخصات کتاب

Nanobodies y sus Aplicaciones Desarrollo de una plataforma para acelerar el descubriemiento de "nanobodies" contra blancos de interes terapeutico

ویرایش: 1 
نویسندگان: Martín A. Rossotti  
سری:  
ISBN (شابک) : 9786202238144, 6202238143 
ناشر:  
سال نشر: 2015 
تعداد صفحات: 116 
زبان: Spanish 
فرمت فایل : PDF (درصورت درخواست کاربر به PDF، EPUB یا AZW3 تبدیل می شود) 
حجم فایل: 4 مگابایت 

کلمات کلیدی مربوط به کتاب نانو اجسام و کاربردهای آنها توسعه پلتفرمی برای تسریع در کشف "نانو اجسام" در برابر اهداف مورد علاقه درمانی: نانو اجسام، ایمونولوژی، ایمونولوژی، نانو اجسام، (VLB-WN) 1680: Technik

در صورت تبدیل فایل کتاب Nanobodies y sus Aplicaciones Desarrollo de una plataforma para acelerar el descubriemiento de "nanobodies" contra blancos de interes terapeutico به فرمت های PDF، EPUB، AZW3، MOBI و یا DJVU می توانید به پشتیبان اطلاع دهید تا فایل مورد نظر را تبدیل نمایند.

توجه داشته باشید کتاب نانو اجسام و کاربردهای آنها توسعه پلتفرمی برای تسریع در کشف "نانو اجسام" در برابر اهداف مورد علاقه درمانی نسخه زبان اصلی می باشد و کتاب ترجمه شده به فارسی نمی باشد. وبسایت اینترنشنال لایبرری ارائه دهنده کتاب های زبان اصلی می باشد و هیچ گونه کتاب ترجمه شده یا نوشته شده به فارسی را ارائه نمی دهد.

توضیحاتی در مورد کتاب نانو اجسام و کاربردهای آنها توسعه پلتفرمی برای تسریع در کشف "نانو اجسام" در برابر اهداف مورد علاقه درمانی

پایان نامه دکتری مدیر پایان نامه: دکتر Gualberto González-Sapienza دانشکده شیمی دانشگاه جمهوری (شهر یا کشور را نشان نمی دهد) اکتبر 2015 علاوه بر آنتی بادی های معمولی، شترها دارای آنتی بادی های غیر زنجیره ای هستند. نوری که در آن یک دامنه واحد محل اتصال آنتی ژن را تشکیل می دهد. این دامنه به نام Nanobody یا VHH یکی از کوچکترین قطعات شناسایی آنتی ژن شناخته شده است. در طبیعت (~ 15 کیلو دالتون) و با ثبات، حلالیت و ویژگی بالا مشخص می شوند. این ویژگی های منحصر به فرد VHH ها همراه با سهولت دستکاری آنها از طریق زیست شناسی مولکولی VHH را جایگزین امیدوارکننده ای برای آنتی بادی های معمولی می کند قطعات آنتی بادی برای کاربردهای بیوتکنولوژیکی متعدد این پایان نامه افق ایجاد فناوری محلی برای نسل را داشت کتابخانه های نانوبادی فاژ رشته ای از لنفوسیت های لاما B (Lama glama). به همین ترتیب، روش‌هایی توسعه یافتند که انتخاب و توصیف آن را تسهیل می‌کند نانو بادی های مورد علاقه در برابر انواع آنتی ژن ها از مولکول های کوچک گرفته تا ساختارهای پیچیده سلولی عملکرد نانو بادی های انتخاب شده در نشان داده شد کاربردهای مختلف بیوتکنولوژیکی بخش اول کار توسعه یک بردار بیان سطح بالا و یک سیستم بیوتینیلاسیون in vivo برای نانوبادی ها که فرآیند غربالگری را تسهیل می کند توصیف موازی صدها کلون به روشی سیستماتیک و سریع. سیستم عالیه تطبیق پذیری و تسهیل مطالعه واکنش پذیری نانو بادی ها توسط فلوسایتومتری، الایزا، میکروسکوپ، رسوب ایمنی و غیره به عنوان اولین کاربرد این سیستم، یک روش رتبه بندی میل ترکیبی نسبی برای آنتی ژن جمعیت نانوبادی ایجاد کرد جدا شده در مرحله انتخاب اولیه (پنینگ) و سیستمی که امکان جستجوی جفت از نانوبادی‌ها برای تشخیص آنتی‌ژن در سنجش‌های ایمنی ساندویچی، که اجازه می‌دهد توسعه یک ELISA فوق حساس برای تعیین کمیت اپوکسی هیدرولاز انسانی 2 در قسمت دوم کار، تهیه کتابخانه ای از نانو اجسام شرح داده شده است. در برابر سلول های دندریتیک موش، و سازگاری پلت فرم کشف نانو بادی ها برای جداسازی آنتی بادی ها علیه گیرنده های سلولی بومی با استفاده از سلول های کامل مراحل جداسازی و شخصیت پردازی به این ترتیب، آنتی بادی ها علیه جزء CD11b گیرنده Mac-1، ناحیه غیر چند شکلی MHC-II و در مقابل گیرنده CD45، توسعه بسیار مرتبطی را تشکیل می دهد زیرا بر خلاف آنتی بادی ها نانوبادی های معمولی به شدت واکنش پذیری خود را در برابر آنتی ژن خود از دست می دهند تغییرات ساختاری کوچک به همین دلیل نانو بادی ها در مقابل گیرنده ها انتخاب شدند نوترکیب های تثبیت شده روی پلی استایرن (صفحه الایزا) به ندرت واکنش نشان می دهند شکل متقابل با گیرنده بومی روی سلول ها. با وجود دومی، و با توجه به اهمیت انتخاب مستقیم با استفاده از گیرنده‌های نوترکیب نشان داده شد که انتخاب دقیق آن شکلی از تثبیت گیرنده نوترکیب، امکان جداسازی نانو بادی ها در برابر گیرنده ها را فراهم می کند. مردم بومی. این با انتخاب نانوبادی ها در برابر زنجیره CD11c گیرنده CDR4 نشان داده شد. که یک نشانگر سلول دندریتیک است. در نهایت، اثبات مفهومی در مورد کاربرد نانو اجسام به عنوان دامنه انجام شد عامل دار کردن، در این مورد برای اعطای توابع موثر به نانو بادی با ظرفیت سم کزاز را خنثی می کند. پس از جداسازی نانوبادی های ضد سم، آنتی بادی ها تهیه شد با ادغام آنها با نانوبادی‌های ضد CD11b، MHCII و CD45 دو گونه‌ای و قدرت آنها خنثی سازی و توزیع زیستی در داخل بدن، افزایش چشمگیری در قدرت پیدا می کند خنثی سازی زمانی که آنتی بادی های خنثی کننده با نانوبادی ضد CD11b فعال شدند (که با گیرنده اندوسیتی واکنش نشان می دهد)، اما نه با anti-MHC-II یا anti-CD45.

توضیحاتی درمورد کتاب به خارجی

Tesis de Doctorado Director de Tesis: Dr. Gualberto González-Sapienza Facultad de Química Universidad de la República (No indica ciudad ni país) Octubre 2015 Además de los anticuerpos convencionales, los camélidos poseen anticuerpos carentes de cadena liviana en los que un único dominio forma el sitio de unión al antígeno. Este dominio, denominado Nanobody o VHH, es uno de los fragmentos de reconocimiento de antígeno más pequeños conocidos en la naturaleza (~15 kDa) y se caracterizan por su alta estabilidad, solubilidad y especificidad. Estas características únicas de los VHHs junto a su facilidad de manipulación mediante biología molecular convierten a los VHH en una prometedora alternativa a los anticuerpos convencionales o fragmentos de anticuerpo para numerosas aplicaciones biotecnológicas. Este trabajo de tesis tuvo como horizonte establecer tecnología local para la generación de bibliotecas de nanobodies en fagos filamentosos a partir de linfocitos B de llamas (Lama glama). Asimismo se desarrollaron metodologías que facilitan la selección y caracterización de los nanobodies de interés contra una variedad de antígenos que van desde pequeñas moléculas hasta complejas estructuras celulares. La funcionalidad de los nanobodies seleccionados se demostró en diferentes aplicaciones biotecnológicas. En la primera parte del trabajo se presenta el desarrollo de un vector de alto nivel de expresión y un sistema de biotinilacion in vivo de los nanobodies que facilita el proceso de screening y caracterización paralela de cientos de clones en forma sistematizada y rápida. El sistema tiene gran versatilidad y facilita el estudio de la reactividad de los nanobodies mediante citometría de flujo, ELISA, microscopía, inmunoprecipitación, etc. Como primer aplicación de este sistema se desarrolló un método de ranqueo de afinidad relativa por el antígeno de la población de nanobodies aislados en la etapa de selección inicial (panning) y un sistema que permite la búsqueda de pares de nanobodies para la detección del antígeno en inmunoensayos tipo sándwich, lo que permitió el desarrollo de un ELISA ultrasensible para la cuantificación de la epoxi-hidrolasa humana. 2 En la segunda parte del trabajo se describe la preparación de una biblioteca de nanobodies contra células dendríticas murinas, y la adaptación de la plataforma de descubrimiento de nanobodies para aislar anticuerpos contra receptores celulares nativos utilizando células enteras para las etapas de aislamiento y caracterización. De esta forma se aislaron anticuerpos contra el componente CD11b del receptor Mac-1, la región no polimórfica del MHC-II y contra el receptor CD45, constituyendo un desarrollo de gran relevancia debido a que, a diferencia de los anticuerpos convencionales, los nanobodies pierden drásticamente la reactividad contra su antígeno ante pequeños cambios conformacionales. Debido a eso los nanobodies seleccionados contra receptores recombinantes inmovilizados sobre poliestireno (placa de ELISA) muy raramente reaccionan en forma cruzada con el receptor nativo en las células. A pesar de esto último, y dada la importancia de dirigir la selección utilizando receptores recombinantes, se mostró que la cuidadosa elección de la forma de inmovilización del receptor recombinante, sí permite aislar nanobodies contra receptores nativos. Esto fue demostrado seleccionando nanobodies contra la cadena CD11c del receptor CDR4 que es un marcador de células dendríticas. Por último se realizó una prueba de concepto sobre la utilidad de los nanobodies como dominios de funcionalización, en este caso para conferir funciones efectoras a nanobodies con capacidad de neutralizar la toxina tetánica. Una vez aislados los nanobodies anti-toxina, se prepararon anticuerpos biespecíficos fusionándolos a los nanobodies anti- CD11b, MHCII y CD45, y se estudió su poder de neutralización y biodistribución in vivo, encontrando un dramático incremento del poder neutralizante cuando los anticuerpos neutralizantes se funcionalizaron con el nanobody anti-CD11b (que reacciona con un receptor endocítico), pero no con el anti-MHC-II o anti-CD45.

فهرست مطالب

A. Resumen.
B. Abreviaciones.
C. Introducción….. ......................................................................................................................................... 1
1. Anticuerpos convencionales ....................................................................................................................... 1
1.1 Estructura y función. 2
1.2 Estructura génica y generación de diversidad. 4
1.3 Aplicaciones biotecnológicas de los anticuerpos. 6
1.4 Formatos de anticuerpos recombinantes. 8
1.4.1 Fragmentos scFv. 8
1.4.2 Fragmentos Fab. 9
1.4.3 Anticuerpo biespecíficos . 9
2. Anticuerpos de cadena pesada................................................................................................................. 10
2.1 Respuesta humoral en camélidos. 11
2.2 Aparición de los hcAb. 12
2.3 Estructura y organización de los genes. 13
2.3.1 Ausencia de dominio constante CH1. 14
2.3.1 Sustituciones aminoacídica sobre el FR2 de los VHHs. 15
2.3.1 Eventos de recombinación que dan lugar a los hcAbs. 16
2.4 Diversidad y forma de reconocimiento. 17
2.5 Aplicaciones biotecnológicas de los nanobodies. 19
2.5.1 Nanobodies como herramientas de investigación. 20
2.5.2 Nanobodies como herramientas diagnósticas. 21
2.5.3 Nanobodies terapéuticos. 22
2.6 Nanobodies multivalentes. 24
2.7 Métodos para la generación y selección de nanobodies. 25
3. Principios y características de la técnica de phage display.................................................................... 26
D. Objetivos de la Tesis ................................................................................................................................ 31
E. Resultados y discusión.
1. Capítulo I: Construcción de bibliotecas de nanobodies y optimización del sistema de expresión .... 32
1.1 Construcción de biblioteca de nanobodies. 32
1.2 Estudio del sistema de expresión de Nbs desde el vector fagémido. 33
1.3 Generación de un vector de expresión de alto rendimiento de los VHH. 34
1.4 Comparación de la expresión de TC7 desde pComb3X y pINQ-H6HA. 35
1.5 Optimización de la expresión de TC7 desde el sistema pINQ-H6HA/BL21(DE3). 36
2. Capítulo II: Desarrollo de un sistema de biotinilación in vivo de nanobodies .................................... 38
2.1 Desarrollo de un sistema de biotinilación in vivo de los nanobodies. 39
2.2 Optimización del sistema de biotinilación in vivo de los nanobodies. 40
2.3 Determinación del porcentaje de biotinilación in vivo de los Nbs. 41
3. Capitulo III: Desarrollo de un sistema de selección de nanobodies por su afinidad relativa contra el
antígeno marcado y por su capacidad de formar pares en inmunoensayos de dos sitos........................ 43
3.1 Selección de nanobodies contra la sEH humana. 43
3.2 Aplicación I: Desarrollo de un método de comparación de la afinidad relativa por el antígeno
conjugado a la HRP. 45
3.3 Aplicación II: Selección de pares de Nbs para la detección de la sEH. 48
3.3.1 Desarrollo de un ELISA sándwich para la cuantificación de la sEH. 52
3.3.2 Performance analítica del ELISA sándwich basado en nanobodies. 52
4. Selección de nanobodies contra receptores de células........................................................................... 54
4.1 Inmunización y evaluación de la respuesta humoral de la llama 1053 inmunizada con células
dendríticas murinas. 55
4.2 Selección de nanobodies contra proteínas de superficie de BMDCs. 55
4.3 Análisis en paralelo de alto número de Nbs mediante citometria de flujo Selección de nanobodies
contra proteínas de superficie de BMDCs. 57
4.4 Identificación de los antígenos reconocidos por los Nbs seleccionados. 58
4.5 Caracterización de los nanobodies anti-CD11b. 62
4.5.1 Afinidad relativa y comportamiento en Western Blot. 62
4.5.2 Mapeo de epítopes sobre CD11b . 63
4.6 Los Nbs biotinilados presentan importantes ventajas en aplicaciones de citometría de flujo respecto a
los anticuerpos convencionales. 63
5. Selección de nanobodies contra epítopes nativos de CD11c.................................................................. 65
5.1 Primera estrategia de selección de nanobodies anti-CD11c. 66
5.2 Segunda estrategia de selección de nanobodies anti-CD11c. 67
5.3 Evaluación de los Nbs anti-CD11c para su uso en la determinación del porcentaje de células
dendríticas de preparaciones de BMDCs. 69
6. Selección de nanobodies contra receptores de células........................................................................... 72
6.1 Selección y caracterización de nanobodies contra la toxina tetánica. 73
6.2 Evaluación de los Nb anti-TT para la neutralización de la toxina in vivo. 74
6.3 Nanobodies como dominios de funcionalización. 75
6.4 Biodistribución de los nanobodies anti-CD11b y anti-CD45. 79
E. Discusión Final ......................................................................................................................................... 81
F. Lista de Artículos presentados en el marco de esta tesis ...................................................................... 86
G. Referencias ............................................................................................................................................... 89
H. Artículos.
I. Agradecimientos

نظرات کاربران

کتاب های تصادفی

دانلود کتاب Complexity Issues in Coding Theory 001

دانلود کتاب Foul Deeds and Suspicious Deaths in Lewisham & Deptford

دانلود کتاب The Dark Side of Innocence: Growing Up Bipolar

دانلود کتاب Financial Management

دانلود کتاب 101 Portrait Photography Tips: For Amateur Photographers