Modern Applications of DNA Amplification Techniques: Problems and New Tools

در ده سال پس از اولین انتشار PCR (Saiki و همکاران، 1985)، این روش in vitro همانندسازی و اصلاح اسید نوکلئیک به رقیب محبوبیت روش‌های میکروبیولوژیکی، ژنتیکی و تکنیکی سنتی برای شبیه‌سازی، توالی‌یابی، تبدیل شده است. تشخیص ژن و روش های مرتبط تا به امروز ادبیات PCR بر شش حوزه اصلی کاربرد تأکید کرده است: نقشه برداری ژنتیکی، تشخیص جهش، پلی مورفیسم ژنتیکی، پیوند و تنظیم رونویسی، ویروس شناسی مولکولی و روش های کمی. تمرکز زیاد کمی سازی DNA یا RNA توسط PCR بر روی میکروبیولوژی انسان و مشکلات انکولوژیکی بوده است. حساسیت فوق العاده PCR به این روش توانایی تشخیص DNAهای بسیار نادر، mRNA ها، mRNA ها در تعداد کمی از سلول ها یا در مقادیر کمی از بافت و mRNA های بیان شده در جمعیت های سلولی مخلوط را می دهد. با این حال، تعیین کمیت دقیق و دقیق اسیدهای نوکلئیک خاص در نمونه‌های بیولوژیکی، علی‌رغم انتشارات متعدد در این زمینه، هنوز یک مشکل عمومی است: در طول فرآیند perR، تعداد اولیه ناشناخته‌ای از توالی‌های هدف به‌عنوان الگو استفاده می‌شود که مقدار زیادی از آن وجود دارد. محصول خاصی را می توان به دست آورد. اگرچه تعیین مقدار محصول تشکیل شده آسان است، اما به سختی می توان تعداد کپی اولیه مولکول هدف را استنتاج کرد زیرا کارایی perR تا حد زیادی ناشناخته است.

In the ten years since the first publication on PCR (Saiki et al. , 1985), this in vitro method of nucleic acid replication and modification has grown to rival in popularity traditional microbiological, genetical und technical procedures for cloning, sequencing, gene detecting and related procedures. To date the PCR literature has emphasized six main areas of application: genetic mapping, detection of mutations, genetic polymorphism, transcriptional splicing and regulation, molecular virology and quantitative procedures. The overwhelming focus of quantification of DNA or RNA by PCR has been on human microbiology and oncological problems. The exquisite sensitivity of PCR gives this method the ability to detect extremely rare DNAs, mRNAs, mRNAs in small numbers of cells or in small amounts of tissue, and mRNAs expressed in mixed-cell populations. However, the exact and accurate quantification of specific nucleic acids in biological samples is in spite of numerous publications in that field still a general problem: during the peR process, an unknown initial number of target sequences are used as a template from which a large quantity of specific product can be obtained. Although the amount of product formed is easy to determine, it is difficult to deduce the initial copy number of the target molecule because the efficiency of the peR is largely unknown.