Kinesin Protocols

اکنون واضح است که پروتئین‌های شبه کینزین (KLP)، که عموماً تصور می‌شود مسئول حمل و نقل محموله‌های سلولی هستند، در بسیاری از فرآیندهای سلولی مختلف که اکنون به طور گسترده در حال بررسی هستند، دخیل هستند. در پروتکل‌های کینزین، ایزابل ورنوس و گروهی از کارشناسان عملی، مولدترین و قابل تکرارترین تکنیک‌های خود را برای شناسایی، خالص‌سازی و شناسایی ابرخانواده کینزین موتورهای وابسته به میکروتوبول ارائه می‌کنند. این روش ها از ابتدایی ترین تا پیچیده ترین را شامل می شود و شامل دستورالعمل های گام به گام و یادداشت های احتیاطی گسترده برای اطمینان از موفقیت آزمایشی است. در میان رویکردهای مورد بحث، روش‌هایی برای بیان و خالص‌سازی کینزین‌ها در سیستم‌های مختلف، مشخص کردن فعالیت ATPase تقویت‌شده با میکروتوبول و خواص حرکتی، و آزمایش فعالیت بی‌ثبات‌کننده میکروتوبول‌ها است. نمونه‌های مفصلی از نحوه پرداختن به مطالعات عملکردی نیز همراه با برخی از روش‌های بسیار جدید برای مطالعه نقش KLP در سازمان‌دهی میکروتوبول‌ها در سه بعدی ارائه شده است. همچنین روش های پیشرفته ای برای مطالعه کینزین ها در سطح ساختاری وجود دارد.
جامع و بسیار کاربردی، پروتکل‌های کینزین، تمام روش‌های اساسی و پیشرفته‌ای را که برای مطالعه موفقیت‌آمیز دنیای چندوجهی پروتئین‌های کینزین مانند و کشف عملکردهای متعدد آن‌ها لازم است، در دسترس قرار می‌دهد.

It is now clear that kinesin-like-proteins (KLP), generally thought to be responsible for the transport of cellular cargoes, are involved in many different cellular processes now being widely investigated. In Kinesin Protocols, Isabelle Vernos and a panel of hands-on experts present their most productive and reproducible techniques for the identification, purification, and characterization of the kinesin superfamily of microtubule-dependent motors. The methods range from the most basic to the most sophisticated and include step-by-step instructions and extensive cautionary notes to ensure experimental success. Among the approaches discussed are methods to express and purify kinesins in different systems, to characterize microtubule-enhanced ATPase activity and motility properties, and to test microtubule destabilizing activity. Detailed examples of how to address functional studies are also presented, along with some very new methods for studying the role of KLP in the organization of microtubules in three dimensions. There are also advanced methods for the study of kinesins at the structural level.
Comprehensive and highly practical, Kinesin Protocols makes available all the key basic and cutting-edge methods needed successfully to study the multifaceted world of kinesin-like proteins and to explore their many functions.