In Situ Detection of DNA Damage: Methods and Protocols

تشخیص و تجزیه و تحلیل آسیب DNA در مطالعه گسترده‌ترین پدیده‌های بیولوژیکی، از آپوپتوز و پیری گرفته تا بیماری‌های قلبی و تولید داروهای ضد سرطان، بسیار مهم است. ولادیمیر دیدنکو و گروهی از متخصصان در «تشخیص درجا آسیب DNA: روش‌ها و پروتکل‌ها»، تمام تکنیک‌های اصلی در محل را برای مطالعه آسیب DNA و آپوپتوز توصیف می‌کنند و نشان می‌دهند که چگونه رویکردهایی که در ابتدا برای نشان‌گذاری سلول‌های آپوپتوز طراحی شده‌اند، می‌توانند برای تجزیه و تحلیل آسیب DNA استفاده شوند. (و بالعکس). تکنیک‌های به‌راحتی قابل تکرار ارائه‌شده در اینجا شامل همه آن‌هایی است که برای تشخیص شکستگی‌های DNA تک‌رشته‌ای و دو رشته‌ای خاص در بخش‌های بافتی در حین استفاده از پلیمرازها، لیگازها، نوکلئازها و کینازها طراحی شده‌اند. پروتکل‌های عمیق برای الکتروفورز تک سلولی (آزمایش دنباله‌دار) و همچنین پروتکل‌هایی برای تشخیص نشانگرهای غیرمستقیم آسیب DNA و پایگاه‌های اصلاح‌شده ارائه شده‌اند. بررسی‌های فنی، ویژگی، حساسیت، مزایا و محدودیت‌های تکنیک‌های توصیف‌شده را مورد بحث قرار می‌دهند و آنها را با رویکردهای جایگزین مقایسه می‌کنند.
پیشرفته‌ترین و بسیار کاربردی، تشخیص درجا آسیب DNA: روش‌ها و پروتکل‌ها برای اولین بار مجموعه کاملی از روش‌های آنزیمی برای تعیین DNA شکسته می‌شود و کار همه کسانی را که نه تنها در مورد تشخیص آسیب DNA در محل، بلکه برچسب‌گذاری سلول‌های آپوپتوز مطالعه می‌کنند، بسیار تسهیل می‌کند.

Detection and analysis of DNA damage is critically important in the study of the widest variety of biological phenomena, ranging from apoptosis and aging to heart diseases and anticancer drug development. In In Situ Detection of DNA Damage: Methods and Protocols, Vladimir Didenko and a panel of experts describe all the major in situ techniques for studying DNA damage and apoptosis, and show how approaches originally designed to label apoptotic cells can be used for DNA damage analysis (and vice versa). The readily reproducible techniques presented here include all those designed to detect specific single- and double-stranded DNA breaks in tissue sections while using polymerases, ligases, nucleases, and kinases. In-depth protocols for single-cell electrophoresis (comet assay) are presented, as well as those for the detection of indirect markers of DNA damage and modified bases. Technical reviews discuss specificity, sensitivity, advantages, and limitations of the techniques described, and compare them with alternative approaches.
State-of-the-art and highly practical, In Situ Detection of DNA Damage: Methods and Protocols presents for the first time a complete set of enzymatic methods for determining DNA breaks, and will greatly facilitate the work of all those studying not only the in situ detection of DNA damage but also the labeling of apoptotic cells.