Heterologous Gene Expression in E.coli: Methods and Protocols

بیان پروتئین در میزبان هترولوگ سنگ بنای تحقیقات زیست پزشکی و صنعت بیوتکنولوژی است. علیرغم وضعیت پیشرفته بیان پروتئین، پیشرفت های فناوری هنوز مورد نیاز است. به عنوان مثال، پروتئین های غشایی درصد قابل توجهی از کل پروتئین های سلولی را تشکیل می دهند، اما به عنوان یک کلاس، بیان بیش از حد بسیار دشوار است، به خصوص در یک میزبان هترولوگ. میزبان ایده آل می تواند توانایی بیان هر پروتئین را با تغییرات پس از ترجمه مرتبط داشته باشد و کار با آن به آسانی E. coli باشد. در بیان ژن هترولوگ در E. coli: روش‌ها و پروتکل‌ها، دانشمندان خبره که از نزدیک با تکنیک‌های مربوطه آشنا هستند، فصل‌هایی را ارائه می‌کنند که کاربرد این میزبان بیان را بسیار گسترش می‌دهد. مشارکت‌های موجود در این جلد مفصل روش‌هایی را توصیف می‌کنند، برای مثال، برای بیان موفقیت‌آمیز پروتئین‌ها در E. coli که در غیر این صورت تجمع‌هایی را در این میزبان ایجاد می‌کنند، برای اضافه کردن تغییرات پس از ترجمه، برای ترکیب کردن باقی‌مانده‌ها یا بخش‌های اسید آمینه غیر استاندارد در E. coli. پروتئین های بیان شده، برای شناسایی شرکای اتصال، و برای بیان پروتئین های غشایی. این فصل ها که در قالب بسیار موفق Methods in Molecular Biology™ نوشته شده اند، شامل مقدمه هایی برای موضوعات مربوطه، فهرستی از مواد و معرف های لازم، پروتکل های آزمایشگاهی گام به گام و به راحتی قابل تکرار و نکاتی در مورد عیب یابی و اجتناب از مشکلات شناخته شده است. بیان ژن هترولوگ عملی و پیشرفته در E. coli: روش‌ها و پروتکل‌ها به دنبال این است که محقق را با تعداد بیشماری از گونه‌های بیانی E. coli در دسترس آشنا کند و E. coli را به ایده‌آل میزبان کامل نزدیک‌تر کند.

Protein expression in a heterologous host is a cornerstone of biomedical research and of the biotechnology industry. Despite the advanced state of protein expression technology improvements are still needed. For example, membrane proteins constitute a significant percentage of the total cellular proteins but as a class are very difficult to overexpress, especially in a heterologous host. The ideal host would have the ability to express any protein, with relevant post-translational modifications, and be as easy to work with as E. coli. In Heterologous Gene Expression in E. coli: Methods and Protocols, expert scientists intimately familiar with the relevant techniques offer chapters that greatly expand the utility of this expression host. The contributions in this detailed volume describe methods, for example, to successfully express proteins in E. coli that would otherwise form aggregates in this host, to add post-translational modifications, to incorporate non-standard amino acid residues or moieties into E. coli expressed proteins, to identify binding partners, and to express membrane proteins. Written in the highly successful Methods in Molecular Biology™ format, chapters include introductions to their respective subjects, lists of the necessary materials and reagents, step-by-step, readily reproducible laboratory protocols, and tips on troubleshooting and avoiding known pitfalls. Practical and cutting-edge, Heterologous Gene Expression in E. coli: Methods and Protocols seeks to familiarize the researcher with the myriad of E. coli expression strains available and move E. coli closer to that ideal of the perfect host.