DNA Cloning: A Hands-on Approach

این کتاب دستورالعمل‌های گام به گام در مورد شبیه‌سازی DNA را ارائه می‌دهد، که به عنوان ژن‌های متحرک در اطراف پلاسمیدها، ژن‌های جهش‌یافته یا استخراج ژن‌های جدید تعریف می‌شود. هدف این است که به کسانی که تازه وارد این حوزه شده‌اند، راهنمایی‌های عملی قابل اعتماد و به‌روز ارائه کنند و در عین حال زمینه خلاقیت را نیز منتقل کنند. پس از خلاصه ای کوتاه از تاریخچه شبیه سازی، اصول و پیش نیازها توضیح داده می شود، به عنوان مثال، نرم افزار، ناقل های رایج در آزمایشگاه، انتخاب مناسب اندونوکلئازهای محدود کننده، تهیه ژل آگارز، سلول های شایسته و صفحات آگار LB را پوشش می دهد. و رویه هایی که باید پس از دریافت پلاسمیدهای جدید دنبال شوند. بقیه کتاب به شرح واضح روش ها و مراحل فردی در شبیه سازی اختصاص دارد. راهنمایی در مورد روش برش و خمیر، تعیین توالی DNA، توالی یابی مستقیم، طراحی پرایمر، درج و حذف ژن مبتنی بر PCR، درج برچسب اپی توپ، استفاده از فناوری RACE، بازترکیب BAC و بسیاری موارد دیگر ارائه شده است. منابع خطا و انواع تکنیک‌هایی که در زمان شبیه‌سازی زندگی را بسیار آسان‌تر می‌کنند نیز به تفصیل مورد بررسی قرار می‌گیرند.

This book offers step-by-step instruction on DNA cloning, defined as moving genes around plasmids, mutating genes, or mining new genes. The aim is to provide those new to the field with reliable and up-to-date practical guidance while at the same time conveying the scope for creativity. After a brief synopsis of the history of cloning, the fundamentals and prerequisites are explained, covering, for example, software, vectors commonly used in the lab, appropriate choice of restriction endonucleases, the preparation of agarose gels, competent cells, and LB agar plates, and procedures to be followed upon receipt of new plasmids. The remainder of the book is devoted to the clear description of methods and individual steps in cloning. Guidance is provided on the cut and paste method, DNA sequencing, direct sequencing, primer design, PCR-based gene insertion and deletion, epitope tag insertion, the use of RACE technology, BAC recombineering, and much, much more. Sources of error and a variety of techniques that make life considerably easier when cloning are also examined in detail.