Der Experimentator. Zellkultur, 3. Auflage

Cover......Page 1
DER EXPERIMENTATOR......Page 3
Der Experimentator:
Zellkultur,
3. Auflage......Page 4
ISBN 9783827425720......Page 5
Vorwort zur 3. Auflage......Page 8
Danksagungen zur 3. Auflage......Page 10
Inhaltsverzeichnis......Page 12
1 Die Geschichte der Zellkultur......Page 18
1.1 Meilensteine in der Zellkultur......Page 19
1.2 Quo vadis Zellkultur?......Page 23
1.2.1 Automation im Zellkulturlabor......Page 24
1.2.2 Tissue engineering –Gewebeersatz aus dem Labor......Page 25
Literatur......Page 28
2 Zellbiologische Grundlagen......Page 30
2.1 Die Entdeckung des Hayflick-Limits......Page 31
2.2 Zelluläre Seneszenz in vitro......Page 33
2.3.1 Die Phasen des Zellzyklus......Page 35
2.3.2 Die Regulation des Zellzyklus......Page 38
2.4.1 Mord oder Selbstmord – das isthier die Frage......Page 43
2.4.3 Schlüsselmoleküle der Apoptose......Page 45
2.4.4 Signalwege der Apoptose......Page 46
2.5.1 Fehlregulation des Zellzyklus......Page 49
2.5.2 Fehlregulation der Zelltodmechanismen......Page 51
2.5.3 Immortalisierung......Page 52
Literatur......Page 54
3 Was braucht man für die Einrichtung eines Zellkulturlabors?......Page 56
3.1.2 Der Vorbereitungsbereich......Page 57
3.2.1 Mikrobiologische Sicherheitswerkbank und Reinraumwerkbank......Page 58
3.2.2 Der Brutschrank......Page 62
3.2.3 Weitere im Sterilbereich benötigte Geräte......Page 64
Literatur......Page 66
4 Relevante Regelwerke......Page 68
4.1 Allgemeine Regelwerke für den Laborbetrieb......Page 69
4.1.1 Biostoffverordnung (BiostoffV)......Page 70
4.1.2 Gefahrstoffverordnung (GefstoffV)......Page 72
4.1.3 Gentechnikgesetz (GenTG)......Page 76
4.2.1 Gute Laborpraxis......Page 81
4.2.2 Gute Zellkulturpraxis......Page 83
4.3.2 DIN 12980......Page 85
4.4.1 Verordnung zum Schutz der Mütter am Arbeitsplatz (Mutterschutzrichtlinienverordnung)......Page 86
5 Zellkulturen, Zelllinien und deren Einsatzmöglichkeiten......Page 88
5.1.1 Die Primärkultur......Page 89
5.1.2 Die permanente Zellkultur......Page 92
5.1.3 hTERT-immortalisierte Zelllinien......Page 93
5.2 Morphologische Merkmale von Zellkulturen......Page 96
5.2.1 Epithelzellen......Page 97
5.2.2 Endothelzellen......Page 98
5.2.3 Bindegewebszellen......Page 99
5.3 Einsatzmöglichkeiten für Zellkulturen......Page 101
5.4 Zellkultursysteme als Ersatz für Tierversuche......Page 102
Literatur......Page 103
6 Steriltechnik und Subkultur......Page 104
6.1 Aseptische Arbeitsweise......Page 105
6.1.1 Arbeiten unter der Sicherheitswerkbank......Page 106
6.2 Sterilisationsverfahren......Page 108
6.2.1 Verfahren mit feuchter Hitze......Page 109
6.2.2 Verfahren mit trockener Hitze......Page 111
6.2.4 Sterilisation durch Strahlung......Page 113
6.3.1 Mediumwechsel......Page 115
6.3.2 Subkultur......Page 116
Literatur......Page 118
7 Medien......Page 120
7.1.5 HAM’s F-10 und F-12......Page 121
7.1.7 RPMI 1640......Page 122
7.2.1 Chang-Medium BMC und MF......Page 123
7.3.1 Medium 199......Page 124
7.3.4 MegaCell und Advanced Medien......Page 125
7.3.5 PANSERIN-Medien......Page 126
7.4 Thermostabile Medien......Page 127
7.5.3 Endothelmedien......Page 128
7.5.5 Medien für die Embryokultur......Page 129
Literatur......Page 130
8 Zellkultursupplemente und andere Zusätze......Page 132
8.1 Seren......Page 133
8.1.2 Serumersatz......Page 134
8.1.3 Hitzeinaktivierung von Serum......Page 135
8.2 Aminosäuren......Page 136
8.3 Natriumhydrogencarbonat......Page 137
8.4 Salze und Puffer......Page 138
8.5 Antibiotika......Page 139
8.6 Antimykotika......Page 142
Literatur......Page 144
9 Adhäsion und Detachment......Page 146
9.1 Die extrazelluläre Matrix und ihre Bedeutung für die Zell-Matrix-Adhäsion......Page 147
9.2 Zelluläre Adhäsionsmoleküle......Page 150
9.3 Zell-Substrat-Adhäsion......Page 153
9.4.1 Detachment-Lösungen......Page 154
Literatur......Page 158
10 Kontaminationen in der Zellkultur......Page 160
10.1 Mycoplasmen......Page 161
10.2 Andere Bakterien......Page 164
10.3 Bakterielle L-Formen......Page 169
10.4 Nanobakterien......Page 170
10.5 Pilze und Hefen......Page 173
10.6 Viren......Page 175
10.7.1 Kreuzkontaminationen......Page 178
10.7.2 Falsch identifizierte Zelllinien......Page 179
Literatur......Page 180
11 Diagnose und Beseitigung von Kontaminationen......Page 182
11.1.1 Diagnose von Mycoplasmen......Page 183
11.1.2 Beseitigung von Mycoplasmen......Page 194
11.2.1 Diagnose von Bakterien......Page 196
11.2.2 Beseitigung von Bakterien......Page 197
11.3.2 Beseitigung von L-Bakterien......Page 199
11.5.1 Diagnose von Pilzen und Hefen......Page 200
11.6.1 Diagnose von Viren......Page 201
11.6.2 Beseitigung von Viren......Page 203
11.7.1 Diagnose von Kreuzkontamiantionen und falsch identifi zierten Zelllinien......Page 204
Literatur......Page 205
12 Kryokonservierung und Langzeitlagerung von Zellen......Page 208
12.1 Grundlagen des Tiefgefrierens......Page 209
12.2 Gefrierschäden......Page 211
12.3 Gefrierschutzmittel......Page 212
12.3.1 Penetrierende Gefrierschutzmittel......Page 213
12.3.2 Nicht penetrierende Gefrierschutzmittel......Page 214
12.4.1 Vorbereitende Arbeiten......Page 215
12.4.2 Einfriermedium......Page 216
12.6 Auftauen von Zellen......Page 217
12.7 Geräte für die Kryokonservierung......Page 218
Literatur......Page 220
13 Zellbiologische und Routinemethoden......Page 222
13.1.1 Kombinierte Zellzählung und Vitaltest mit Trypanblau im Hämocytometer......Page 223
13.1.2 Automatisierte Zellzählung mit  einem Zellzählgerät......Page 226
13.2.1 LDH-Test......Page 228
13.2.2 XTT-Test......Page 229
13.3 Populationsverdopplungszeit......Page 231
13.4 Darstellung und Anfärbung von Chromosomen......Page 232
13.4.1 Historisches zur Entdeckung der Chromosomen und zur Entwicklung der Präparationstechnik......Page 233
13.4.2 Das Prinzip der Methode......Page 234
13.4.3 Giemsa-Färbung......Page 237
13.4.4 Bestimmung des mitotischen Index......Page 238
Literatur......Page 239
14 Moderne Techniken in der angewandten Zellkultur......Page 240
14.1.1 Die Entdeckung von RNAi......Page 241
14.1.2 Wie funktioniert der RNAi-Mechanismus?......Page 242
14.1.3 Durchführung eines RNAi-Experiments......Page 243
14.1.4 Kritische Punkte in einem RNAi-Experiment:......Page 249
14.2 In vitro-Differenzierung am Beispiel mesenchymaler Stammzellen......Page 250
14.2.2 Mesenchymale Stammzelldiff- erenzierung......Page 251
14.2.3 Schlussbemerkungen......Page 255
14.3.1 Der Koloniebildungstest......Page 256
14.3.3 Vorbereitende Arbeiten......Page 258
14.3.4 Protokolle für den 2D- und 3D-Koloniebildungstest......Page 260
Literatur......Page 262
15 Fortbildungsmöglichkeiten......Page 264
15.1 Institut für Biologie und Medizin (IFBM)......Page 265
15.3 BD Biosciences und in vitro-Institut für Molekularbiologie......Page 266
15.5 IBA AKADEMIE......Page 267
16 Nützliche Adressen und Informationen......Page 270
16.1.2 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)......Page 272
16.1.5 Humane Brustkrebszelllinien (SUM-LINES)......Page 273
16.1.9 National Laboratory for the Genetics of Israeli Populations......Page 274
16.2.2 Cell Culture Service (CCS)......Page 275
16.2.5 Fraunhofer-Institut fü rBiomedizinische Technik (IBMT)......Page 276
16.3 Datenbanken......Page 277
16.3.3 Deutsches Ressourcenzentrumfür Genomforschung (RZPD)......Page 278
16.4 Gebrauchte Laborgeräte......Page 279
16.5.1 Relevante Regelwerke für die Arbeit mit Zellkulturen......Page 280
16.6.1 Deutschsprachige Zeitschriften......Page 281
16.6.2 Englischsprachige Zeitschriften......Page 282
Index......Page 284
D......Page 285
K......Page 286
P......Page 287
U......Page 288
Z......Page 289