Bioquímica : técnicas y métodos.

Bioquímica técnicas y métodos
	Legales
	Prólogo
	Índice Breve
	Índice
		La bioquímica y su estudio
			Introducción
			Como enfocar un estudio en bioquímica
			Niveles de investigación en bioquímica
				Estudios con un animal entero
				Estudios de órganos aislados
				Estudios con cultivos de tejidos y de células
				Estudios con orgánulos celulares
				Estudios moleculares
			Figuras
				Figura 1.1
				Figura 1.2
				Figura 1.3
				Figura 1.4
				Figura 1.5
				Figura 1.6
				Figura 1.7
				Figura 1.8
				Figura 1.9
				Figura 1.10
				Figura 1.11
		Seguridad y riesgo
			Introducción
			Normas de seguridad
				Productos químicos
					Etiquetado
					Almacenamiento
				Medidas de seguridad personales. Comportamiento del investigador
				Fuentes de peligro en el laboratorio
				Investigaciones con productos radiactivos
				Investigaciones con microorganismos patógenos
			Normas GLP: the good laboratory practices
			Figuras
				Figura 2.1
				Figura 2.2
				Figura 2.3
				Figura 2.4
				Figura 2.5
				Figura 2.6
				Figura 2.7
				Figura 2.8
				Figura 2.9
		La metodología analítica
			Introducción
			Fundamento de los métodos de análisis bioquímicos
				Métodos químicos
				Métodos físicos
				Métodos enzimáticos
				Métodos inmunológicos
				Métodos de hibridación
			Errores de los métodos analíticos
				Variabilidad de los datos analíticos
					Errores accidentales
					Errores sistemáticos
				Valoración de los métodos analíticos
				Control de calidad de los resultados
			Selección del método de análisis
			Presentación de los datos
			Figuras
				Figura 3.1
				Figura 3.2
				Figura 3.3
				Figura 3.4
				Figura 3.5
				Figura 3.6
				Figura 3.7
				Figura 3.8
				Figura 3.9
				Figura 3.10
				Figura 3.11
				Figura 3.12
				Figura 3.13
				Figura 3.14
				Figura 3.15
				Figura 3.16
				Figura 3.17
		Otención de muestras
			Introducción
			Muestra de sangre
				Recogida de muestras de sangre
					Punción venosa
					Punción arterial
					Punción cutánea
				Anticoagulantes
				Alteraciones en las muestras de sangre durante la conservación y el procesamiento
				Agentes desproteinizantes
			Muestra de orina
				Composición de la orina
				Recogida de muestras de orina
					Orina de una micción
					Orina de un tiempo determinado
				Deterioro de las muestras de orina. Conservantes
			Figuras
				Figura 4.1
				Figura 4.2
				Figura 4.3
				Figura 4.4
				Figura 4.5
				Figura 4.6
				Figura 4.7
				Figura 4.8
				Figura 4.9
		Técnicas espectrofotométricas y fluorimétricas
			Introducción
			Espectrofotometría
				La Luz
				Distribución de la energia en los átomos y en las moléculas
					Distribución de la energía en los átomos
					Distribución de la energía en las moléculas
				Absorción de la radiación
				Emisión y absorción atómica
				Absorción molecular. Regiones ultravioleta y visibles
				Absorciometría molecular. Ley de Beer-Lambert
			Técnicas de Fluorescencia molecular
			Figuras
				Figura 5.1
				Figura 5.2
				Figura 5.3
				Figura 5.4
				Figura 5.5
				Figura 5.6
				Figura 5.7
				Figura 5.8
				Figura 5.9
				Figura 5.10
				Figura 5.11
				Figura 5.12
				Figura 5.13
				Figura 5.14
				Figura 5.15
				Figura 5.16
				Figura 5.17
				Figura 5.18
				Figura 5.19
				Figura 5.20
				Figura 5.21
				Figura 5.22
				Figura 5.23
				Figura 5.24
				Figura 5.25
				Figura 5.26
				Figura 5.27
				Figura 5.28
		Técnicas radioquímicas
			Introducción
			Tipos de radiactividad
				Partículas
				Partículas ߯
				Positrones ß(+)
				Captura electrónica
				Rayos y
			Desintegración radiactiva
			Unidades de radiactividad
			Detección y medición de la radiactividad
				Contadores Geiger-Müller
				Contadores de centelleo
					Contadores de centelleo sólido
					Contadores de centelleo líquido
				Autorradiografía
			Figuras
				Figura 6.1
				Figura 6.2
				Figura 6.3
				Figura 6.4
				Figura 6.5
				Figura 6.6
				Figura 6.7
				Figura 6.8
				Figura 6.9
				Figura 6.10
				Figura 6.11
				Figura 6.12
				Figura 6.13
		Métodos de determinación de bioelementos
			Introducción
			Tratamiento de las muestras para la determinación de metales y elementos traza
			Métodos de determinación de biolelementos
				Determinación de calcio
				Determinación de fósforo
				Determinación de sodio y potasio
				Determinación de hierro
			Figuras
				Figura 7.1
				Figura 7.2
				Figura 7.3
				Figura 7.4
		Métodos de determinación de aminoácidos
			Introducción
				Estructura de los aminoácidos
			Métodos químicos para la determinación de aminoácidos totales
				Método de la ninhidrina
				Reacción de Sanger
				Reacción del fenilisotiocianato
				Método del o-ftaldehído
				Reacción de la fluorescamina
				Reacción del cloruro de dansilo
			Métodos químicos para la determinación de aminoácidos individuales
			Figuras
				Figura 8.1
				Figura 8.2
				Figura 8.3
				Figura 8.4
				Figura 8.5
				Figura 8.6
				Figura 8.7
				Figura 8.8
				Figura 8.9
				Figura 8.10
				Figura 8.11
				Figura 8.12
		Técnicas de separación: cromatografía
			Introducción
			Principio de las técnicas de separación. técnicas físicas
			Polaridad
				Volatilidad
				Solubilidad
				Adsorción
			Carga
			Tamaño
			Diseño de las técnicas de separación de moléculas
			Técnicas cromatográficas
			Técnicas cromatográficas basadas en la polaridad
				Cromatografía líquido-sólido de adsorción
				Cromatografía gas-líquido: GLC
				Cromatografía líquido-líquido. cromatografía líquida de alta precisión (HPLC)
			Cromatografía de intercamibio iónico
			Cromatografía de permeabilidad. Cribado molecular
			Figuras
				Figura 9.1
				Figura 9.2
				Figura 9.3
				Figura 9.4
				Figura 9.5
				Figura 9.6
				Figura 9.7
				Figura 9.8
				Figura 9.9
				Figura 9.10
				Figura 9.11
				Figura 9.12
				Figura 9.13
				Figura 9.14
				Figura 9.15
				Figura 9.16
				Figura 9.17
				Figura 9.18
				Figura 9.19
				Figura 9.20
				Figura 9.21
				Figura 9.22
				Figura 9.23
				Figura 9.24
				Figura 9.25
		Métodos de determinación de aminoácidos individuales
			Introducción
			Determinación de aminoácidos por TLC
				Separación unidimensional
				Separación bidimensional
				Determinación de aminoácidos por TLC con reacciones múltiples
				Separaciones de aminoácidos derivatizados
					Cromatografía de DNP-aminoácidos
					Cromatografía de dansil-aminoácidos
			Determinación de aminoácidos por HPLC
				Ejemplo de determinación de aminoácidos individuales libres por HPLC: Pico-Tag
			Analizadores automáticos de aminoácidos
			Figuras
				Figura 10.1
				Figura 10.2
				Figura 10.3
				Figura 10.4
				Figura 10.5
				Figura 10.6
				Figura 10.7
				Figura 10.8
				Figura 10.9
				Figura 10.10
				Figura 10.11
				Figura 10.12
				Figura 10.13
				Figura 10.14
				Figura 10.15
		Métodos de determinación de proteínas
			Introducción
			Estructura de las proteínas
			Fuerzas determinantes de la estructura proteica
				Fuerzas electroestáticas
				Puentes de hidrógeno
				Fuerzas hidrofóbicas
				Fuerzas de Van der Waals
				Puentes disulfuro
			Desnaturalización de las proteínas
			Métodos generales de cuantificación de proteínas
				Método de Kjeldahl (determinación del contenido en nitrógeno)
				Método del biuret
				Método de Lowry
				Método del BCA
				Método de Bradford
				Nefelometría
				Determinación de albúmina
				Determinación de hemoglobina
			Figuras
				Figura 11.1
				Figura 11.2
				Figura 11.3
				Figura 11.4
				Figura 11.5
				Figura 11.6
				Figura 11.7
				Figura 11.8
				Figura 11.9
				Figura 11.10
				Figura 11.11
				Figura 11.12
				Figura 11.13
				Figura 11.14
				Figura 11.15
				Figura 11.16
				Figura 11.17
				Figura 11.18
				Figura 11.19
		Técnicas de separación: electroforesis
			Introducción
			Fundamento de la electroforesis
				Componentes de un sistema electroforético
				Migración electroforética
					Naturaleza de los componentes a separar
					Campo eléctrico
					Tampón
					Soporte
			Tipos de electroforesis
				Electroforesis en papel de filtro
				Electroforesis en membranas de acetato de celulosa
				Electroforesis en geles de almidón
				Electroforesis en geles de agarosa
				Electroforesis en geles de policrilamida
			Visualización y cuantificación de los resultados
			Aplicaciones particulares de la electroforesis
				Isoelctroenfoque
				Electroforesis en gel de policrilamida con SDS: SDS-PAGE
				Electroforesis en gradiente
				Electroforesis bidimensional
				Electroforesis capilar (CE)
			Figuras
				Figura 12.1
				Figura 12.2
				Figura 12.3
				Figura 12.4
				Figura 12.5
				Figura 12.6
				Figura 12.7
				Figura 12.8
				Figura 12.9
				Figura 12.10
				Figura 12.11
				Figura 12.12
				Figura 12.13
				Figura 12.14
				Figura 12.15
				Figura 12.16
				Figura 12.17
		Técnicas enzimáticas
			Introducción
			Enzimas
				Especificidad de acción y de sustrato`
				Estructura de las enzimas
				Cinética enzimática
					Modelo de Michaelis-Menten
					Significado de las constantes cinéticas del modelo Michelis-Menten: Km y V max
				Clasificación de las enzimas
			Diseño de la medida de la actividad enzimática
				Medio de reacción
				Medida de la velocidad de reacción
				Detección del sustrato o del producto de una reacción enzimática
			Las enzimas como reactivos
			Figuras
				Figura 13.1
				Figura 13.2
				Figura 13.3
				Figura 13.4
				Figura 13.5
				Figura 13.6
				Figura 13.7
				Figura 13.8
				Figura 13.9
				Figura 13.10
				Figura 13.11
				Figura 13.12
				Figura 13.13
				Figura 13.14
				Figura 13.15
				Figura 13.16
				Figura 13.17
		Técnicas inmunoquímicas
			Introducción
				Anticuerpos
				Obtención de anticuerpos policlonales y monoclonales
				Interacciones antígeno-anticuerpo
			Técnicas analíticas inmunoquímicas
				Reacciones de precipitación
					Inmunoprecipitación en solución
					Inmunoprecipitación en gel
				Ensayos inmunoquímicos que utilizan marcadores
					Radioinmunoensayos (RIA) y ensayo inmunoradiométrico (IRMA)
					Inmunoensayo enzimático (EIA): Marcaje con ezimas
					Fluoroinmunoensayo
					Western Blot
			Figuras
				Figura 14.1
				Figura 14.2
				Figura 14.3
				Figura 14.4
				Figura 14.5
				Figura 14.6
				Figura 14.7
				Figura 14.8
				Figura 14.9
				Figura 14.10
				Figura 14.11
				Figura 14.12
				Figura 14.13
				Figura 14.14
				Figura 14.15
				Figura 14.16
				Figura 14.17
				Figura 14.18
				Figura 14.19
				Figura 14.20
				Figura 14.21
				Figura 14.22
				Figura 14.23
				Figura 14.24
		Métodos de determinación de proteínas individuales
			Introducción
			Técnicas de separación de proteínas
				Cromatografía de proteínas
					Cromatografía de intercambio iónico
					Cromatografía de cribado molecular
					Cromatografía de afinidad
				Electroforesis de proteínas
					Electroforesis en papel de filtro
					Electroforesis en acetato de celulosa
					Electroforesis en geles de agarosa
					Electroforesis en geles de policrilamida
			Técnicas de cuantificación de proteínas específicas
				Determinación en clínica de enzimas plasmáticas
					Enzimas de baja concentración
					Transaminasas
					Lactato deshidrogenasa
				Determinación de proteínas por técnicas inmunoquímicas
					Determinación de insulina por ELISA en sándwich
					Determinación de la proteína UCP1 por ELISA competitivo
					Determinación de la proteína UCP1 por Western blot
			Figuras
				Figura 15.1
				Figura 15.2
				Figura 15.3
				Figura 15.4
				Figura 15.5
				Figura 15.6
				Figura 15.7
				Figura 15.8
				Figura 15.9
				Figura 15.10
				Figura 15.11
				Figura 15.12
				Figura 15.13
				Figura 15.14
				Figura 15.15
				Figura 15.16
				Figura 15.17
				Figura 15.18
				Figura 15.19
				Figura 15.20
				Figura 15.21
				Figura 15.22
				Figura 15.23
				Figura 15.24
		Métodos generales de determinación de lípidos
			Introducción
				Clasificación y estructura de los lípidos
					Lípidos simples
					Lípidos complejos
					Lipoproteínas plasmáticas
			Determinación de lípidos
				Obtención y preparación de las muestras
				Métodos de extracción de lípidos
				Cuantificación de lípidos totales
				Determinación de glicerol
				Determinación de triacilgliceroles
					Métodos químicos para la determinación de triacilgliceroles
					Métodos enzimátiocos para la determinación de triacilgliceroles
				Determinación de ácidos grasos libres
				Determinación de colesterol
					Métodos químicos para la determinación de colesterol
					Métodos enzimáticos para la determinación de colesterol
				Determinación de cuerpos cétonicos
			Figuras
				Figura 16.1
				Figura 16.2
				Figura 16.3
				Figura 16.4
				Figura 16.5
				Figura 16.6
				Figura 16.7
				Figura 16.8
				Figura 16.9
				Figura 16.10
				Figura 16.11
				Figura 16.12
				Figura 16.13
				Figura 16.14
				Figura 16.15
				Figura 16.16
				Figura 16.17
				Figura 16.18
				Figura 16.19
				Figura 16.20
				Figura 16.21
				Figura 16.22
				Figura 16.23
				Figura 16.24
				Figura 16.25
				Figura 16.26
				Figura 16.27
				Figura 16.28
		Técnicas de separación: diálisis, filtración y centrifugación
			Introducción
			Diálisis
			Filtración
			Técnicas de centrifugación
				Fundamentos de las técnicas de centrifugación
				Diseño de la instrumentación para técnicas de centrifugación
					Tipo de rotores
				Tipos de centrifugación
					Centrifugación preparativa
					Centrifugación analítica
			Figuras
				Figura 17.1
				Figura 17.2
				Figura 17.3
				Figura 17.4
				Figura 17.5
				Figura 17.6
				Figura 17.7
				Figura 17.8
				Figura 17.9
				Figura 17.10
				Figura 17.11
				Figura 17.12
				Figura 17.13
				Figura 17.14
		Métodos de determinación de lípidos individuales
			Introducción
			Fraccionamiento de mezclas de lípidos
				Extracción con disolventes
				Extracción en columna
				Cromatografía en capa fina
			Determinación de ácidos grasos
				Determinación de ácidos grasos por cromatografía de gases
				Determinación simultánea de ácidos grasos libres y esterificados en plasma
			Determinación de las lipoproteínas plasmáticas
				Separación de lipoproteínas por ultracentrifugación
				Separación de lipoproteínas por electroforesis
				Determinación de lipoproteínas por métodos inmunológicos
			Determinación de fosfolípidos de membrana
			Figuras
				Figura 18.1
				Figura 18.2
				Figura 18.3
				Figura 18.4
				Figura 18.5
				Figura 18.6
				Figura 18.7
				Figura 18.8
				Figura 18.9
				Figura 18.10
				Figura 18.11
				Figura 18.12
				Figura 18.13
		Métodos de determinación de carbohidratos
			Introducción
			Estructura de los carbohidratos
				Monosacáridos
				Disacáridos
				Polisacáridos
			Métodos para la determinación de carbohidratos
				Preparación de las muestras
				Métodos químicos para la determinación de carbohidratos
					Métodos de reducción del cobre
					Reacciones con ácidos fuertes y fenoles
				Métodos enzimáticos para la determinación de carbihidratos
			Separación de mezclas de carbohidratos e identificación
				Cromatografía en papel y en capa fina
				Cromatografía de gases y HPLC
			Figuras
				Figura 19.1
				Figura 19.2
				Figura 19.3
				Figura 19.4
				Figura 19.5
				Figura 19.6
				Figura 19.7
				Figura 19.8
				Figura 19.9
				Figura 19.10
				Figura 19.11
				Figura 19.12
				Figura 19.13
				Figura 19.14
				Figura 19.15
				Figura 19.16
				Figura 19.17
				Figura 19.18
				Figura 19.19
				Figura 19.20
				Figura 19.21
				Figura 19.22
				Figura 19.23
				Figura 19.24
				Figura 19.25
				Figura 19.26
				Figura 19.27
				Figura 19.28
				Figura 19.29
				Figura 19.30
				Figura 19.31
				Figura 19.32
		Métodos de determinación de ácidos nucleicos
			Introducción
				Estructura de los ácidos nucleicos
			Métodos de aislamiento de ácidos nucleicos
				Métodos de aislamiento y purificación de ADN
				Métodos de aislamiento y purificación de ARN
			Métodos generales de cuantificación de ácidos nucleicos
				Determinación por espectrofotometría
				Método de tinción con bromuro de etidio
				Método del ácido diamino benzoico (DABA) para la determinación de ADN
			Figuras
				Figura 20.1
				Figura 20.2
				Figura 20.3
				Figura 20.4
				Figura 20.5
				Figura 20.6
				Figura 20.7
				Figura 20.8
				Figura 20.9
				Figura 20.10
				Figura 20.11
				Figura 20.12
		Técnicas de hibridación y PCR
			Introducción
			Proceso de hibridación
				Formación y separación de la doble hebra de ADN
				Medio de hibridación
			Diseño de los métodos de hibridación
				Preparación de las sondas: producción y marcaje
					Producción de sondas
					Tipos de marcaje
				Inmovilización de la muestra
				Hibridación y lavados
				Cuantificación
			Reacción en cadena de la polimerasa: PCR
				Fundamento de la PCR
				Diseño de las técnicas de PCR
					Medio de reacción
					Etapas de la PCR
					Visualización de los productos
				RT-PCR
			Figuras
				Figura 21.1
				Figura 21.2
				Figura 21.3
				Figura 21.4
				Figura 21.5
				Figura 21.6
				Figura 21.7
				Figura 21.8
				Figura 21.9
				Figura 21.10
				Figura 21.11
				Figura 21.12
				Figura 21.13
				Figura 21.14
				Figura 21.15
				Figura 21.16
		Métodos de determinación de ácidos nucleicos individuales
			Introducción
			Separación electroforética de los ácidos nucleicos
			Estudio del ADN
				Uso de enzimas de restricción y fingerprinting
				Southern blot
				Análisis de RFLPs
				Reacción en cadena de la ligasa (LCR, Ligase Chain Reaction)
				Secuenciación del ADN
					Métodos de fragmentación química
					Método del terminador de cadena
			Estudio del ARN
				Dot blot y Slot blot
				Northern blot
				RT-PCR
			Figuras
				Figura 22.1
				Figura 22.2
				Figura 22.3
				Figura 22.4
				Figura 22.5
				Figura 22.6
				Figura 22.7
				Figura 22.8
				Figura 22.9
				Figura 22.10
				Figura 22.11
				Figura 22.12
				Figura 22.13
				Figura 22.14
				Figura 22.15
				Figura 22.16
				Figura 22.17
				Figura 22.18
				Figura 22.19
				Figura 22.20
		Bibliografía por capítulos
		Índice Analítico