Advances in GAPDH Protein Analysis: A Functional and Biochemical Approach

این کتاب رویکردهای تحلیلی مدرن و کلاسیکی را ارائه می‌کند که برای توصیف بیوشیمیایی و عملکردی پروتئین کهن الگویی، گلیسرآلدئید-3-فسفات دهیدروژناز (GAPDH) بسیار مهم هستند. وجه تمایز کتاب این است که علاوه بر روش های دیگر، برخی از تکنیک های غیر معمول اما ارزشمند را نیز پوشش می دهد. به عنوان مثال، تجسم فعالیت آنزیم در ژل، پروتکل‌های ایمونوبلات برای پروتئین‌های بومی (غیر دناتوره)، و پروتئین‌های حل‌شده با گرادیان pH [IEF-isoelectrofocusing] و غیره. این روش‌های مفید برای تأیید خواص بیوشیمیایی مرتبط و حیاتی هستند. GAPDH یا پروتئین مشابه مورد علاقه

این کار به تشریح پروتکل‌های دقیقی می‌پردازد که برای بررسی ایزوفرم‌های کلاسیک (سلولی) و اخیراً گزارش‌شده خارج سلولی (ترشحی) GAPDH ضروری هستند. دقیقاً، این کتاب تکنیک‌های مربوط به تجزیه و تحلیل آنزیمی و غیر آنزیمی GAPDH را پوشش می‌دهد که شامل، اما نه محدود به، سنجش تغییر تحرک الکتروفورتیک (EMSA)، بلات دو بعدی (2 بعدی)، میکروسکوپ ایمونوفلورسانس/کانفوکال، طیف‌سنجی جرمی، -کروماتوگرافی تبادلی و میل ترکیبی

خوانندگان اهمیت روش‌های تجربی شرح‌داده‌شده در کتاب را در رابطه با ارزیابی نقش و اهمیت GAPDH پی خواهند برد. علاوه بر این، اکثر روش‌های توصیف‌شده در کتاب علاوه بر سایر گروه‌های تحقیقاتی در سراسر جهان، در آزمایشگاه نویسنده نیز تأیید شده‌اند و بر تکرارپذیری و تکرارپذیری پروتکل‌ها تأکید می‌کنند. هر روش با یک چکیده و یک پس زمینه مختصر شروع می شود که بر کاربرد و ارتباط آن تأکید می کند. این امر خوانندگان را قادر می سازد تا انتخاب طرح آزمایشی را با توجه به اهداف تحقیق خود تعیین کنند.

این کتاب روش ها را به طور سیستماتیک با تصاویر فراوان توضیح می دهد تا درک سریع و آسان دانش عملی را تسهیل کند. اگرچه این کتاب بر روی GAPDH متمرکز است، بسیاری از پروتکل‌ها ممکن است با کمترین تغییرات برای پروتئین‌ها یا آنزیم‌های دیگر به کار گرفته شوند. قابل توجه است که به صراحت ثابت شده است که GAPDH یک پروتئین چند عملکردی است که در چندین فرآیند سلولی شرایط سلامت و بیماری نقش دارد. از این رو، این کتاب راهنمای عملی ارزشمندی برای محققان جوان، دانشمندان و متخصصان بالینی خواهد بود.

This book presents modern and classic analytical approaches that are crucial for the biochemical and functional characterization of the archetypal protein, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). The distinguishing feature of the book is that it covers, in addition to other methods, some of the uncommon but valuable techniques as well. For example, in-gel visualization of enzyme activity, immunoblotting protocols for native (non-denatured) proteins, and proteins resolved by pH-gradient [IEF-isoelectrofocusing], etc. These expedient methods are relevant and vital for the verification of biochemical properties of GAPDH, or similar protein of interest.

This work outlines detailed protocols that are essential to investigate classical (cellular) and recently reported extracellular (secretory) isoforms of GAPDH. Precisely, the book covers techniques pertinent to enzymatic and non-enzymatic analysis of GAPDH that include, but not limited to, electrophoretic mobility shift assay (EMSA), two-dimensional (2D)-immunoblotting, immunofluorescence/confocal microscopy, mass spectrometry, ion-exchange and affinity chromatography.

Readers will discover the importance of the experimental methods described in the book as they relate to the evaluation of the role and significance of GAPDH. Furthermore, majority of the methods described in the book have also been validated in the author’s laboratory, besides other research groups worldwide, underlining the repeatability and reproducibility of the protocols. Each method begins with an abstract and a brief background emphasizing its application and relevance. This will enable the readers to determine the choice of experimental design according to their research objectives.

The book explains the methods systematically with ample illustrations to facilitate quick and easy comprehension of the practical knowledge. Although the book is focused on GAPDH, many of the protocols may be adopted to other proteins or enzymes with minimal modifications. Noteworthy, it is unequivocally established that GAPDH is a multifunctional protein involved in several cellular processes of health & disease conditions. Hence, this book will be a valuable practical guide for young researchers, scientists and clinician-scientists.